島津制備HPLC 色譜柱的選擇方法

更新時間：2020-01-20

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填料的選擇

在進(jìn)行制備 HPLC 時，需要選擇純度盡可能高，并可同時得到大量化合物的色譜柱。硅膠基體填充制備 HPLC 色譜柱，廣泛用于合成化學(xué)、天然物化學(xué)等領(lǐng)域。反相制備 HPLC 色譜柱利用不同化學(xué)鍵合相保持峰型，實現(xiàn)高純度精制。特別是 Inertsil 系列制備 HPLC 色譜柱同時具備 HPLC 分析色譜柱的高分離性能和低吸附性。此外，在進(jìn)行制備 HPLC 時，與樣品負(fù)荷量的大小、較短的色譜柱清洗時間、再平衡化時間快速化、溶劑去除的速度等相關(guān)的洗脫液的選擇很重要?？扇鏉M足上述項目要求的 Inertsil ODS-3 是更適于反相 HPLC 制備的色譜柱。

填料	特性
InertSustain C18	耐久性*，使用強酸強堿樣品及洗脫液時推薦使用。
Inertsil ODS-4	保留能力中等，理論塔板數(shù)、分離度適中。
Inertsil ODS-3	保留能力*，可獲得大負(fù)荷量的色譜柱，制備的首要之選色譜柱。
除上述之外，也提供其他反相、正相、SEC、手性制備用色譜柱。

色譜柱內(nèi)徑和負(fù)荷量、流量關(guān)系

制備 HPLC 色譜柱的內(nèi)徑從 6.0mm 到 100mm 不等，可以根據(jù)使用目的及使用裝置的設(shè)定流量范圍不同進(jìn)行選擇。填料及色譜柱長度等內(nèi)徑以外的條件全部相同的話，流量及樣品負(fù)荷量根據(jù)色譜柱的橫截面積的比例調(diào)整后，幾乎可以得到相同的色譜圖。以下是制備 HPLC 常用的制備柱內(nèi)徑及使用流量的總結(jié)，供大家參考。

內(nèi)徑	負(fù)荷量	*使用流量標(biāo)準(zhǔn)（mL/min） 1**			手性	備注
內(nèi)徑	負(fù)荷量	反相·正相	SEC	HILIC	手性	備注
4.6mm	1 倍	1	0.2～0.3	0.5	1	反相、正相、HILIC、手性的規(guī)模放大研究一般使用內(nèi)徑4.6mm的色譜柱。
7.6- 8.0mm	2.7倍	2.7	0.5～1.0	1.4	2.7	可以用在普通分析裝置上的半制備 HPLC 色譜柱。用 SEC 的規(guī)模放大研究一般使用內(nèi)徑 7.6 ～ 8.0mm的色譜柱。
10mm	5倍	5	1.0～1.5	2.4	5
14mm	9倍	9.2	1.8～2.5	4.6	－
20mm	19倍	19	3.8～5.4	9.5	19	制備 HPLC 用色譜柱。由于流量范圍增大，需要使用裝置。而且，內(nèi)徑 50mm 以上的尺寸，為了使安裝配管時簡單化，大多采用法蘭型式的色譜柱。
30mm	45倍	45	9.0～14	21	45
50mm	130倍	130	26～39	60	50 *3
100mm	240倍	480 *2	48～72 *2	120 *2	200 *3
1：5μm 粒徑柱的情況 2：10μm 粒徑柱的情況 *3：20μm 粒徑柱的情況

色譜柱長度

柱長	特性
50mm 以下	主要作為制備柱的保護柱。
50～100mm	分離沒有障礙的話，可實現(xiàn)短時間制備。
100～250mm	常用的長度。制備HPLC中，推薦使用容易取得高理論塔板數(shù)的250mm色譜柱。
250mm 以上	制備液相為了進(jìn)行高流量分析，使用粒徑大于10μm、壓力低的填料。由于大粒徑填料不易取得高理論塔板數(shù)，在制備HPLC中會使用長色譜柱彌補低理論塔板數(shù)這一缺陷。而且，尺寸排阻色譜為了達(dá)到相同目的，也會使用長柱。

制備HPLC 規(guī)模放大

使用制備HPLC 色譜柱研究純化條件時，所需樣品量和溶劑量多，造成成本高。所以，一般使用分析色譜柱探討精制條件，然后規(guī)模放大到制備色譜柱。

但是，如果不使用具有與分析色譜柱同等性能的制備色譜柱，則可能會造成分離效果不佳。Inertsil 即使是大口徑色譜柱，峰對稱性也很好，對稱因子（Asy）接近1，理論塔板數(shù)（N）在長度250mm 時維持著近20,000 段。因此，可順利實現(xiàn)從內(nèi)徑4.6mm到50mm 的規(guī)模放大。

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